河北來復(fù)醫(yī)藥科技有限公司
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美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾屬于β受體阻斷藥（英：Beta blockers）（又稱β受體阻斷劑），其是一類用來治療心律不齊、防止心臟病發(fā)作后的二次心臟病發(fā)作（二級預(yù)防）和在某些情況下用來治療高血壓的藥物。β受體阻斷藥非競爭性阻斷交感神經(jīng)系統(tǒng)中內(nèi)源性兒茶酚胺腎上腺素和去甲腎上腺素的作用，尤其是腎上腺素能β受體。有些藥物阻斷所有β-腎上腺素能受體，有些則為競爭性阻斷。
材料與方法
美托洛爾（Metoprolol)，分子式C15H25NO3 ，分子量267.36，CAS : 37350-58-6，pKa 9.5，Kow 1.8。其結(jié)構(gòu)式見圖1。
氧烯洛爾(Oxprenolol)，分子式C15H23NO3 ，分子量265.35，CAS : 6452-71-7，pKa 9.5，Kow 2.2。其結(jié)構(gòu)式見圖2。
普萘洛爾(Propranolol)，分子式C16H21NO2 ，分子量259.34，CAS : 525-66-6，pKa 9.5，Kow 3.48。其結(jié)構(gòu)式見圖3。
本實驗使用Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板對血漿樣品中的美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾進行檢測。Cleanert® Micro Plate可拆卸微孔PEP板(Cat: PE00501-MW, Spec: 5 mg, 1mL/well, 2 plates)，Cleanert® M96 生物樣品前處理儀，1mL 96孔接收板，Venusil MP C18 ( 2.1x150mm，5μm，100? )，以上產(chǎn)品均為天津博納艾杰爾科技有限公司產(chǎn)品；
LC/MS/MS, API 4000+液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（AB SCIEX）。
HPLC條件
色譜柱：Venusil MP C18 ( 2.1x150mm, 5μm, 100 ?);
流速：300 μL/min；
柱溫：30℃；
進樣量：10 μL；
流動相：A-0.1%甲酸水溶液；B-0.1%甲酸乙腈溶液。
表1 HPLC梯度條件
|
Total Time(min) |
Flow Rate(μl/min) |
A (%) |
B (%) |
|
0 |
300 |
78 |
22 |
|
10 |
300 |
78 |
22 |
質(zhì)譜條件
掃描模式：電噴霧電離正模式；
采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）；
電噴霧電壓：5000V；
氣簾氣（curtain gas）：15；
霧化氣（gas 1）：50；
輔助氣（gas 2）：40；
離子源溫度（TEM）：500℃
表2 串聯(lián)質(zhì)譜參數(shù)
|
化合物 |
保留時間 |
Q1 |
Q3 |
DP |
CE |
|
美托洛爾（Metoprolol) |
2.5 |
268.3 |
116.1* |
115 |
26 |
|
191.0 |
25 |
||||
|
氧烯洛爾(Oxprenolol) |
4.1 |
260.1 |
183. 1* |
100 |
24 |
|
157.1 |
29 |
||||
|
普萘洛爾(Propranolol) |
7.7 |
266.1 |
116.1* |
105 |
24 |
|
225.1 |
19 |
注：*為定量離子
標準品制備
將美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾標準品各10 mg與10 mL甲醇混合，配置含美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾1 mg/mL的混合標準品。
將1 mg/mL的混合標準品溶液每次用水稀釋10倍，最終配置100 ppb和10ppb的混合標準品。
樣品處理方法
樣品準備：
①高濃度(50 ppb)：將100 ppb混合標準品與血漿等體積混合，配置50 ppb血漿加標樣品。
②低濃度(5 ppb): 將10 ppb混合標準品與血漿等體積混合，配置5 ppb血漿加標樣品。
③不加標：將水與血漿等體積混合，配置不加標的血漿樣品。
固相萃取實驗過程
活化：加入200 μL甲醇； 加入200 μL水；
上樣：200 μL樣品；
淋洗：200 μL 5%甲醇水溶液；
洗脫：50 μL含2%甲酸的乙腈和異丙醇混合溶液=4:6；用150 μL的水定容洗脫液到200 μL，混勻，待測。
結(jié)果
表3. 血漿中美托洛爾、氧烯洛爾、普萘洛爾的回收率，n=8
|
添加濃度 |
美托洛爾 平均回收率(RSD) |
氧烯洛爾 平均回收率(RSD) |
普萘洛爾 平均回收率(RSD) |
|
50 ng/mL |
108.7% (RSD=3.3%) |
103.1% (RSD=5.1%) |
106.0% (RSD=4.4%) |
|
5 ng/mL |
107.7% (RSD=4.5%) |
99.0% (RSD=4.5%) |
94.2% (RSD=8.4%) |
結(jié)論
本實驗使用Cleanert® Micro Plate PEP可拆卸微孔板提取血漿中美托洛爾、氧烯洛爾和普萘洛爾，使用微量體積洗脫，洗脫液不需要氮吹濃縮復(fù)溶即可達到相同的檢出限。回收率和RSD值良好，可用于相關(guān)的檢測。
訂貨信息
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產(chǎn)品名稱 |
規(guī)格/包裝 |
訂貨號 |
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Cleanert Micro Plate PEP |
5 mg,1 mL/well,可拆卸, 2塊 |
PE00501-MW |
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Cleanert M96 生物樣品前處理儀 |
與96孔板匹配 |
SPE-M96 |
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96位接收板 |
1 mL/well，與96孔板匹配 |
96SP1036-Y |
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Venusil MP C18 |
2.1x150mm,5 μm,100 ? |
VA950502-2 |
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甲醇 |
LC-MS級, 4*2.5L |
LC230 |
|
水 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC365 |
|
乙腈 |
LC-MS級，4*2.5L/箱 |
LC015 |
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