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LC/MS/MS檢測血清中類固醇激素-Cleanert PEP

發(fā)布日期:2019-03-29

類固醇激素又稱為甾體激素，是內(nèi)分泌細胞分泌的高效能生物化學(xué)物質(zhì)。它們在維持生命、調(diào)節(jié)機體物質(zhì)代謝、促進性器官發(fā)育和維持生育等方面起著重要作用。

類固醇激素在體內(nèi)的含量較低，對其準確定量具有重要意義。本實驗采用Cleanert® PEP 96微孔板對血清樣品進行凈化，建立了血清中類固醇激素的檢測方法，該方法適合高通量樣品前處理。

目標物信息

表1 化合物結(jié)構(gòu)

材料及儀器

Cleanert PEP 96微孔板(5mg/1mL)；96孔板正壓裝置；96位接收板；Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150 ?）；API 4000+。

樣品處理方法

樣品預(yù)處理

100μL血清樣品與100μL 含有1%甲酸的甲醇/水溶液混合（50/50，v/v）

SPE過程

活化：依次用200μL甲醇、200μL水活化；

上樣：將預(yù)處理過的血清樣品上樣至96孔板中；

淋洗：加入400μL甲醇/水(35/65, v/v)用于淋洗樣品中的干擾物；

洗脫：加入200μL 1%甲酸甲醇，用96位收集板收集洗脫液用于LC-MS/MS檢測。（將洗脫液氮吹濃縮可獲得更低的檢測限）

儀器檢測條件

HPLC條件

色譜柱：Venusil ASB C18（2.1*50mm，3μm，150?）

流速：200μL/min

柱溫：30℃

進樣量：3μL

流動相：0.1%甲酸水/0.1%甲酸乙腈（ 40/ 60，v/v）

質(zhì)譜條件

掃描模式：電噴霧電離正模式

采集模式：多反應(yīng)監(jiān)測（MRM）

表2 參數(shù)信息

結(jié)果

圖1 30ppb類固醇激素標準溶液色譜圖

圖2 血清樣品色譜圖

圖3 血清加標樣色譜圖（濃度為30ppb）

表3 加標回收率數(shù)據(jù)

加標濃度	醛固酮	氫化可的松	睪酮	脫氫表雄酮	黃體酮
30ppb	85.9%	87.0%	105.5%	110.6%	97.7%

結(jié)論

在臨床檢驗中類固醇激素是一個難點。本實驗使用Cleanert® PEP 96孔板提取血清中的類固醇，加快了檢測速度，相較免疫法提高了最低檢測濃度，回收率高于85%，可滿足實驗室檢測相關(guān)物質(zhì)的需要。

訂貨信息表

應(yīng)用編號：YB10007

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